比色分析测量仪器和测量方法(比色分析,吸光光度法,比色测量仪器)

　　（二）比色测量仪器

　　1．光电比色计

　　光电比色计用光电池和检流计测量透射光的强度并直接可读出百分透光率T（%）或吸光度A。图8-9是581-G型光电比色计的示意图。它是利用滤光片把钨灯产生的白光中与测定无关的光除去，使入射光尽可能是接近溶液补色的单色光，从而提高了比色分析的准确度。

图8－9　 581-G型光电比色计光学线路示意图

图8-10　721型分光光度计光学系统示意图１.光源　２.,8.聚

光透镜　３.棱镜　４.准直镜5.,11.保护玻璃 6.入射狭缝 7.

平面镜 9.吸收池10.光门 12.光电管 13.光栅

　　2．721型分光光度计

　　721型分光光度计的工作波长范围为360-800nm。采用真空光电管作为光电能量转换元件，在整个可见光区都比较灵敏。同时采用晶体管放大电路和电表直读结构，仪器的灵敏度和稳定性都比较好。

　　图8-10为721型分光光度计的光学系统示意图。由光源发出的连续辐射于聚光镜上，经平面镜转角90度反射到入射狭缝，射入单色器。入射光经过准直镜反身射在出射狭缝上，再经过聚光透镜后进入比色皿。经溶液吸收后的透射光通过光门照射在光电管上转换为光电流信号，经过入大后输入检流计，由电表直接显示吸光度。

　　二、比色分析的测量方法

　　无论是光电比色计还是分光光度计，最常用的测量方法有如下两种。

　　（一）标准曲线计

　　先配制一系列不同浓度的标准溶液，用选定的显色剂显色。选用合适波长的入射光（光电比色计用滤光片，分光光度计可转动波长调节器）。测定时先以空白溶液调节透光率100%，然后分别测定标准系列的吸光度。以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标作图得到一条通过原点的直线，叫做标准曲线（或称工作曲线）。

　　例如，测定维生素B12时，可预先绘制维生素B12的A-c标准曲线（图8-11），再用完全相同的方法和步骤测定被测溶液的吸光度，即可从标准曲线上找出被测溶液的浓度或含量。

　　这种方法叫做标准蛐线法。标准曲线可在固定仪器和方法的条件下多次使用，适合于经常性工作。但若仪器不同或测定方法及条件改变，测得的标准曲线不同。因此在更换任何测定条件时都需重新绘制标准曲线。

图8-11 维生素B₁₂的标准曲线

　　（二）直接比较计算法

　　若仅对个别样品进行测定，且A-c曲线线性良好，可水作标准曲线而直接比较测定结果。

　　先配制一个被测物质溶液浓度相近的标准溶液，与被测溶液在相同条件下测定吸光度。根据下式可以计算。

A_标=K_标c_标b_标

A_测=K_测c_测b_测

　　由于使用同一波长的入射光，采用同样的比色皿，测定同样的物质。所以

K_标=K_测

b_标=b_测

　　因此A_标/A_测=c_标/c_测

　　则c_测=A_测/A_标×c_标

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