流式细胞术对外周血白细胞的免疫荧光分析

　　三、淋巴细胞亚群的测定及其在临床医学中的实用意义

　　淋巴细胞由于表面特异性抗原的差异可分为四大类（表10-3)，这些不同抗原表现型的亚群执行不同的机能。而且某些疾病会选择性地损伤某些亚群而造成亚群之间的比例失调。根据FCM双荧光分析的结果，现将不同的抗原和不同的机能的淋巴细胞亚群列于表10-4。

表10-13 主要淋巴细胞亚群的表面抗原

　　＋：表现的抗原；－：未表现的抗原；＋／－：主要亚群有表现的抗原；－／＋：抗原仅表现于少数亚群。

表10－14　淋巴细胞机能性亚群

　　外周血白细胞的机能，特别是淋巴细胞的机能状态在一定程度上反应了机体的免疫机能。近几年来，用FCM来测定某些疾病的淋巴细胞及其亚群已成为重要的诊断和预后判断的指标，如对骨髓、器官移植，白血病、淋巴瘤的诊断和对免疫缺陷病的估价等。测定淋巴细胞亚群的主要依据是在于淋巴细胞表面不同的抗原表现型，而这些表现型又依赖于相应的单克隆抗体而被识别。所以，特异性很高的单克隆抗体结合先进的FCM，已为临床提供了不少非常有用而重要的资料，但被FCM所分析的淋巴细胞的整个临床意义尚未完全认识清楚。随着更多确定淋巴细胞表现型的试剂的应用，FCM对诊断和治疗计划的拟定以及预后的估计将会表现出更重要的实用意义。

　　1．T淋巴细胞亚群的测定如前所述，在使用FCM分析时，先用0^。散射和90^。光散射双指标将白细胞分为三群：淋巴细胞、单核细胞和粒细胞。在二维点图上划出淋巴细胞群范围后，设立GFL的RFL单指标的直方图。命电子计算机仅计数所输入的淋巴细胞，即划线框出的那部分细胞。一般计数输入的细胞可设1000～5000个。直方图的分析可显示阳性细胞的百分率。应用输入细胞数、阳性细胞百分数以及白细胞分类计数，就能得到阳性细胞的绝对值，即每立方毫米血液中的绝对值。有时T淋巴细胞某亚群的绝对值比百分率更为重要，因为它可以表明T细胞某亚群的增高和减少。当然，淋巴细胞占白细胞的百分数也是一个重要数据，应当准确测出。

　　CD₄/CD₈细胞的比值，有时也用于反映病人淋巴系统的机能状态。不少临床免疫实验室已把CD₄/CD₈的值作为常规血检查的项目。在国际上，淋巴细胞亚群以及CD₄/CD₈并未建立统一数值，各实验室均需建立自己的标准。平均值一般为1.73～2.00。

　　一般而言，影响淋巴细胞亚群的因素较多，如年龄、性别、种族、以及外周围环境如季节　、药品等的影响。T细胞的绝对值在儿童略高于成人。婴儿CD₄细胞的百分率较成年人高；老年人的CD₈略低。正常人在一昼夜内也有周期性的波动：上午CD₄略低，下午4时之后开始增加，直至次晨，平均波动为15%～20%。尽管正常情况下淋巴细胞亚群有所变动，但仍属正常范围。某些疾病，如器官移植、免疫疾病、免疫抑制和一些淋巴细胞肿瘤，其淋巴细胞亚群及其比值测量结果均可能偏离正常范围。

　　有工作报道，传统的T辅助诱导细胞（CD₄⁺)具有抑制机能，而在T抑制细胞毒细胞（CD₄⁺)中，有些又具有协助的功能。因此，对原来设想的CD₄、CD₈的机能分群有所混淆。预计会有新的单克隆抗体再从CD₄和CD₈的细胞中分出。不过就目前看来，不少临床免疫实验室已用CD₄/CD₈比值结合淋巴细胞绝对值对多种疾病的诊断、治疗和预后的估计提供了不少有价值的资料。

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