实习七、荧光光度法测定尿中的核黄素
（一)目的意义
尿中核黄素排出量测定是评价人体核黄素营养状况的一种方法，包括负荷试验和核黄素肌酐比值。
（二)原理
含有核黄素的溶液在紫外线下发黄绿色荧光，在稀溶液中荧光强度与核黄素浓度成正比。核黄素又可被低亚硫酸钠还原而失去荧光，故测定还原前后的荧光强度可去除干扰性荧光物质的影响。
（三)仪器和试剂
1．荧光光度计。
2．酸性水取浓硫酸0.3ml，加蒸馏水至200ml。
3．核黄素标准储备液 精确称取25mg核黄素于1000ml容量瓶中，用酸性水稀释至刻度，移至棕色瓶内，冷藏备用。
4．核黄素标准应用液 吸取上液4ml，用酸性水稀释至100ml，临用时配。
5．低亚硫酸钠(Na2S204)。
（四)操作步骤
1．样品 取尿样1ml加酸性水19ml于一具塞试管内，混匀，在激发波长420nm和发射波长530nm测定荧光强度。记下读数(A)后，取10会计资格mg低亚硫酸钠直接加入比色杯内，摇匀，立即测定荧光强度并记下读数(B)。
2．内标准取尿样1ml加核黄素标准应用液1.5ml，加酸性水17.5ml，混匀，在同样条件下测定荧光强度，记下读数(C)。
（五)计算
尿中核黄素含量(μg)= ×内标核黄素含量（μg)× 尿总量（ml)/分析用尿量（ml)
（六)说明
1．所有操作需在暗室内进行。
2．做内标准的目的是除去尿样中可能存在的有荧光的物质。
3．在使用荧光光度计医学全.在线www.med126.com时需用荧光红钠校正。荧光红钠溶液的配制：溶解25.Omg荧光红钠(sodium fluorescein)于少量水中，搅拌使其溶解后加水至25Oml，此液为储备液。取储备液0.25ml加水稀释至250ml，为工作液。校正步骤：先选择所需激发波长和发射波长，校正仪器零点，然后以荧光红钠工作液校正光计使指针在某一刻度，在测定样品的荧光强度。
4．如遇尿样浑浊，难以直接读数，可将尿液按上述方法稀释后，过硅镁层析再进行测定（见食品中核黄素测定)。
