含苦参制剂—苦参汤有效部位—黄岑苷、汉黄岑苷、黄岑素、汉黄岑

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方法名称：	含苦参制剂—苦参汤有效部位—黄岑苷、汉黄岑苷、黄岑素、汉黄岑素—HPLC
应用范围：	本方法适用于苦参汤有效部位中黄岑苷、汉黄岑苷、黄岑素、汉黄岑素含量的测定
方法原理：	本品加稀乙醇回流提取，经液相色谱分离，在280 nm处测定峰面积，外标法计算含量
仪器设备及实验条件：	仪器 Waters 515高效液相色谱仪；2487紫外检测器，Millennium32软件系统；25 μL可调进样器色谱条件色谱柱：Phenomenex Luna C₁₈色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：甲醇-磷酸水溶液（磷酸-水（2∶530))（45∶55)；流速：1.0 mL/min；检测波长：280 nm；柱温：室温
试样制备：	对照品溶液的制备精密称取黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素对照品4.30、3.70、3.26、3.40 mg，分别置50 mL量瓶中，加甲醇超声溶解，并稀释至刻度摇匀，备用。供试品溶液的制备按苦参汤处方单味药比例，称取苦参、黄芩、生地黄一定量，混匀，用稀乙醇回流提取。乙醇提取液减压回收溶剂，残留物加水分散，通过大孔吸附树脂柱，树脂柱水洗去杂后，用稀乙醇洗脱。乙醇洗脱液回收溶剂，残留物减压干燥，得苦参汤有效部位。精密称取苦参汤有效部位约5 mg置10 mL量瓶中，加50 %甲醇超声溶解，并稀释至刻度，摇匀，备用。阴性样品溶液的制备根据苦参汤原方比例，称取苦参、生地黄二药混合，按苦参汤有效部位制备工艺制备阴性样品后采用供试品溶液制备方法制备阴性样品溶液。
操作步骤：	分别精密吸取黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素对照液以及苦参汤有效部位供试品溶液适量，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积。以外标法计算黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素含量。
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备注：
参考文献：	刘斌，石任兵，姜艳艳.HPLC法测定苦参汤有效部位中4种黄酮类成分含量.北京中医药大学学报. 2005.28（6)：59~62