板蓝根--精氨酸、苏氨酸、丙氨酸、脯氨酸、缬氨酸含量测定--HPLC

仪器设备  Agilent1100系列高效液相色谱仪，包括Agilent1100泵（双泵，高压剃度)，自动进样器，DVD检测器，柱温箱，Agilent色谱工作站。

色谱条件  色谱柱：Phenomenex ODS 3(5μm,250mm×4mm)；流动相A：称取醋酸钠30g，加3400mL水溶解，用醋酸调PH至6.5，然后加水至3700mL，加乙腈280mL，用0.45μm滤膜过滤；流动相B：乙腈-水（4:1)。

梯度洗脱：流速1.0 mL/min，流动相A与B比例，0.00min为100:0；18.00min为91:9；18.01min为80:20；40.00min为67:33；40.01min为0:100，保持5min。

对照品溶液的制备  取对照品苏氨酸10mg，丙氨酸4mg，缬氨酸5mg精密称定，加水溶解并定容至10mL，再取精氨酸和脯氨酸对照品20mg，精密称定，置100mL量瓶中，加入上述苏氨酸、丙氨酸、缬氨酸对照品溶液，再加水定容至刻度，制成每lmL分别含0.15，0.01，0.004，0.15，0.005mg的混合对照液。

内标溶液的制备  取正亮氨酸对照品4.5mg，加0.1mol/L盐酸，制成每1mL含0.9mg的内标溶液。

供试品溶液的制备  取板蓝根药材，粉碎成粗粉，取0.5g，精密称定，精密加入水50mL，超声30min，补重，滤过，取滤液，即得。

对照品和供试品溶液衍生化  取对照品溶液或供试品溶液200μL，加正亮氨酸内标溶液20μL，加入0.1mol/L异硫氰酸苯酯乙腈溶液100μL，1mol/L三乙胺乙腈溶液100μL，混匀，室温下放置1h，加入正己烷400μL，振摇，放置10min，取下层溶液，即得。