苦丁茶老叶—槲皮素和山柰素的含量测定方法—HPLC

仪器   Waters液相色谱仪（美国Waters公司)

色谱条件 　色谱柱：Waters公司N0va—PakC18柱（3.9 mm×300 mm，4 μm)；流动相：甲醇—0.4 %磷酸溶液（50∶50) ；流速：0.7 mL/min；检测波长：360 nm；柱温：40 ℃

对照品溶液制备  精密称取槲皮素对照品8.12 mg，山柰素对照品8.34 mg，分别置50 mL量瓶中，用甲醇溶解，并稀释至刻度再稀释2.5倍即得对照品溶液。

供试品溶液制备  称取苦丁茶老叶20 g，剪碎，加70 %乙醇200 mL，水浴回流1.5 h，过滤，残渣再加70 %乙醇100 mL，回流1 h；合并滤液，用70 %乙醇定容至250 mL量瓶中。取20 mL提取液置水浴上挥干，再用20 mL甲醇溶解残渣并转移到100 mL锥形瓶中，加入25 %盐酸溶液5 mL，置水浴上回流水解0.5 h后，取出，迅速冷却至室温，转移至50 mL量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。