| 公开(公告)号 | CN1869239A |
| 公开(公告)日 | 2006.11.29 |
| 申请(专利)号 | CN200610040766.8 |
| 申请日期 | 2006.06.01 |
| 专利名称 | 一种融合蛋白的酵母表达载体及其基因工程产品 |
| 主分类号 | C12N15/81(2006.01)I |
| 分类号 | C12N15/81(2006.01)I;C12N1/19(2006.01)I |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 南京农业大学 |
| 发明(设计)人 | 陈溥言;葛菲菲;邱亚峰;曹瑞兵;周 斌 |
| 地址 | 210095江苏省南京市卫岗1号南京农业大学科技处钱宝英 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 南京经纬专利商标代理有限公司 |
| 代理人 | 楼高潮 |
| 国省代码 | 江苏;32 |
| 主权项 | 一种融合蛋白的酵母表达载体，是通过以下方法获得的： 1)设计引物： 上游引物p1：5’GAATTCATCCTCCTGCTGTTGGTC3’； 下游引物p2：5’GGATCCGAAGGGGTTCACTGTCAC3’； 以乙脑E蛋白基因为模板，通过PCR方法扩增获得乙脑E蛋白上主要抗原片段基因，E蛋白上主要抗原片段基因位于乙脑SA14-14-2毒株基因组的946nt-2058nt； 2)设计引物： 上游引物p1：5’GGATCCATGGCTCGTGCGGTCGGGATCGACC3’； 下游引物p2：5’TCTAGAAACTTGGCCTCCCGGCCGTCGTCG3’； 以人结核杆菌H37Rv标准株的基因组为模板，PCR方法扩增出M.T hsp70基因，M.T hsp70基因登录号为X58406； 3)首先将E蛋白上主要抗原片段基因用酶切位点EcoR I和BamH I连接到pBluescript SK+质粒中，然后将M. Thsp70基因用酶切位点BamH I和Xba I连接到pBluescript SK+质粒中E蛋白主要抗原片段基因的下游，因此获得将E蛋白主要抗原片段基因和M.T hsp70基因融合在pBluescript SK+上的载体SK-E-hsp70，再通过EcoR I和Xba I这两个酶切位点将E蛋白主要抗原片段基因和M.T hsp70基因形成的融合基因切下来，随后同样通过EcoRI和Xba I这两个酶切位点连接到毕赤酵母表达载体pPICZ α-A上，从而构建成功融合酵母表达载体pPICZ α-E-hsp70。 |
| 摘要 | 本发明涉及一种融合蛋白的酵母表达载体及其基因工程产品，属于生物技术制药工业中的基因工程生产疫苗药物的技术领域。分别以乙脑E蛋白基因和人结核杆菌H37Rv标准株的基因组为模板扩增出E蛋白主要抗原片段基因和M.Thsp70基因，先将这两个基因以一个酶切位点BamHI连接的方式克隆入pBluescript SK+质粒中，最后将该融合基因克隆入pPICZ α-A中，构建酵母表达载体pPICZ α-E-hsp70，按照说明书，该融合表达载体pPICZ α-E-hsp70线性化后，电转化酵母菌，通过甲醇诱导表达，从而获得融合蛋白E-hsp70，来开发研制相关的基因工程产品。 |
| 国际公布 |
