| 公开(公告)号 | CN1243019C |
| 公开(公告)日 | 2006.02.22 |
| 申请(专利)号 | CN03158278.8 |
| 申请日期 | 2003.09.22 |
| 专利名称 | 重组人红细胞生成素的分离纯化工艺 |
| 主分类号 | C07K14/505(2006.01)I |
| 分类号 | C07K14/505(2006.01)I;C07K1/36(2006.01)I |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 南京师范大学 |
| 发明(设计)人 | 胡云龙;张双全 |
| 地址 | 210097江苏省南京市宁海路122号 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 南京知识律师事务所 |
| 代理人 | 栗仲平;王东升 |
| 国省代码 | 江苏;32 |
| 主权项 | 一种重组人红细胞生成素的分离纯化工艺，包括以下步骤：蓝胶填料层析：用PB缓冲液平衡蓝胶填料层析柱，用经过微米膜过滤后细胞培养上清上样，用PB缓冲液冲洗层析柱至基线，用20mMPB+0.75MNaCl缓冲液洗脱；金属螯合亲和柱层析流动相I：用0.1MEDTA-Na2+1MNaCl平衡4.0C.V，流动相II：用50％-70％异丙醇+1％-5％TFA平衡3.0C.V，流动相III：用0.1MNaAc.HAC+0.2MCuSO4.5H2O平衡3.0C.V，用20mMPB+0.5MNaCl平衡3.0C.V，用蓝胶层析柱收集的洗脱蛋白峰上样，流动相IV：用20-50mMPB+0.5-0MNaCl冲洗，收集穿透液；脱盐柱层析用注射用水冲洗3.0C.V，用pH7.0的20mMTris-HCl缓冲液平衡层析柱3.0C.V，用金属螯合亲和层析柱收集的穿透液上样，用pH7.0的20mMTris-HCl缓冲液洗脱，收集洗脱蛋白峰；离子交换柱层析流动相I：用20mMTris-HCl缓冲液平衡4.0C.V，用脱盐填料柱层析收集的洗脱蛋白峰上祥，流动相II：用50mMNaCl/20mMTris-HCl缓冲液洗脱杂蛋白，流动相III：用150mMNaCI/20mMTris-Hcl缓冲液进行洗脱目的蛋白峰，收集目的蛋白峰经过0.22微米膜过滤；以上工艺中第一步层析的蓝胶填料选自BlueSepharose.FastFlow和CM-AFFI-BlueGel，第二步层析的金属螯和亲和填料选自M.C20和ChaletingSepharose.FastFlow，第三步层析的脱盐填料选自SephadexG-25(Medium)，SephadexG-25(Fine)，第四步层析的离子交换层析填料选自SourceQ，DEAESepharose，ResourceQ，PorosD50，QSepharoseXL和QSepharoseHighperformance，QsepharoseFastFlow和QSepharoseBigBeads。 |
| 摘要 | 重组人红细胞生成素的分离纯化工艺，包括以下步骤：1、Blue sepharose.F.F层析；2、金属螯合亲和柱层析；3、Sephadex G-25柱层析；4、Source Q柱层析，收集目的蛋白峰经过0.22微米膜过滤。本发明是一种低成本的重组人红细胞生成素的生产方法。本工艺中不使用反相层析和有机溶剂，避免蛋白质在层析过程中发生变性和有机溶剂的残留。本工艺采用Blue Sepharose.FastFlow金属螯和亲和层析，Sephadex G-25层析和Source Q层析顺序组合纯化工艺路线，可以大规模制备药用级的rHuEPO蛋白。 |
| 国际公布 |
