| 公开(公告)号 | CN1236055C |
| 公开(公告)日 | 2006.01.11 |
| 申请(专利)号 | CN03130264.5 |
| 申请日期 | 2003.06.27 |
| 专利名称 | 高转移倾向的人乳腺癌细胞系及其建立方法 |
| 主分类号 | C12N5/00(2006.01)I |
| 分类号 | C12N5/00(2006.01)I |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 南开大学 |
| 发明(设计)人 | 叶丽虹;张晓东;朱惠芳;吴莲英;鞠永健 |
| 地址 | 300071天津市卫津路94号 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 天津市学苑有限责任专利代理事务所 |
| 代理人 | 解松凡 |
| 国省代码 | 天津;12 |
| 主权项 | 一种高转移倾向人乳腺癌细胞系LM-MCF-7，其特征是用下述方法建立的：1)接种SCID鼠：取乳腺癌亲本MCF-7细胞悬液皮下接种于SCID小鼠肩部，所述细胞悬液的浓度为5×107/0.2ml；2)确认转移部位：将SCID鼠处死，对各个组织的病理切片进行显微镜下观察，确立其转移灶的部位为肺脏、脾脏、骨髓和淋巴结；3)高转移倾向的人乳腺癌细胞系的获得：接种MCF-7细胞68天后，将SCID鼠处死，取出肺脏，进行原代培养，采用下列步骤：用加有双抗的Hank’s液漂洗组织块5分钟；使用剪刀剪碎组织，去除血液、脂肪、神经组织、结缔组织和坏死组织；将肺组织剪切成1mm3左右小块；将剪切好的小块用眼科镊送入培养瓶，用接种针将其均匀摆置，间隔0.5cm；组织块放好后，轻轻将培养瓶翻转，让瓶底朝上，盖好瓶盖，放置在37℃CO2培养箱内；放置3小时，将培养瓶慢慢翻转平放，向瓶内注入10mlRPMI1640培养液，所述培养液含20％血清，静置培养；原代培养每3天换液一次，去除已漂浮的组织块和残留的血细胞；当由组织块中长出的细胞能够长满培养瓶底部后，进行细胞传代，具体步骤如下：向瓶中加入1-2ml消化液，室温3分钟后，观察到细胞质回缩、细胞间隙增大，吸除消化液，加入PBS将培养瓶残留的消化液洗掉；用吸管吸去瓶内培养液，反复吹打瓶壁细胞，使之脱离瓶壁形成细胞悬液，计数，分别接种新的培养瓶，当细胞传代到第三代，将原代培养时用的20％胎牛血清降为10％；来源于该肺组织的原代培养传代的细胞呈现上皮样，细胞形态均一，无接触抑制，并且生长十分迅速，两天就能长满瓶底，需要传代，该细胞系进行了100代以上的培养，该细胞系即为LM-MCF-7；4)LM-MCF-7细胞体内成瘤：当LM-MCF-7细胞体外培养20代后，将瘤细胞再回注到SCID鼠皮下，方法同前；成瘤率达到100％，并且在SCID鼠的肺脏、肾脏、脾脏、骨髓、淋巴结和心脏出现广泛转移。 |
| 摘要 | 本发明涉及癌细胞系，特别是一种高转移倾向的人乳腺癌细胞系及其建立的方法，属动物细胞系领域。有关肿瘤的侵袭与移转的机制目前尚不十分清楚。需要建立肿瘤转移动物模型对其进行深入的研究。以往在肿瘤转移动物模型中应用裸鼠，在本发明中，我们采用SCID小鼠作为实验对象，取乳腺癌亲本MCF-7细胞悬液(5×107/0.2ml)皮下接种于SCID小鼠肩部，接种MCF-7细胞68天后，将SCID鼠处死，取出肺脏，进行原代培养，当由组织块中长出的细胞能够长满培养瓶底部后，进行细胞传代，将该细胞命名为LM-MCF-7。当LM-MCF-7细胞体外培养20代后，将瘤细胞再回注到SCID鼠皮下，方法同前；成瘤率达到100％(5/5只)，并且在SCID鼠的肺脏、肾脏、脾脏、骨髓、淋巴结和心脏等脏器出现广泛转移。 |
| 国际公布 |
