公开(公告)号 | CN1554770A |
公开(公告)日 | 2004.12.15 |
申请(专利)号 | CN200310106227.6 |
申请日期 | 2003.11.07 |
专利名称 | 含CpG DNA畜禽疫苗佐剂的PCR制备方法 |
主分类号 | C12P19/34 |
分类号 | C12P19/34;A61K39/39 |
分案原申请号 | |
优先权 | |
申请(专利权)人 | 深圳市未来海洋科技发展有限公司 |
发明(设计)人 | 朱鸿飞;李光富 |
地址 | 210096广东省深圳市中心区福中一路江苏大厦30楼45号信箱 |
颁证日 | |
国际申请 | |
进入国家日期 | |
专利代理机构 | 南京经纬专利商标代理有限公司 |
代理人 | 王之梓 |
国省代码 | 广东;44 |
主权项 | 一种能促进畜禽疫苗效价的含CpGDNA畜禽疫苗佐剂的PCR制备方法,其特征在于:第一步:基因工程重组质粒的制备:根据由序列为:5’----GGTGCATCGATGCAGGGGGG---3’、5’----GGTGCGTCGATGCAGGGGGG---3’及5’---TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT---3’串联而成的D19D282006目的片段DNA的序列,合成其寡核苷酸正链和负链,在合成的寡核苷酸末端加上能与线性载体末端相匹配的碱基序列,然后将此寡核苷酸片段、退火缓冲液、及无菌重蒸水混合后,于90℃~100℃水浴中孵浴3分钟以上,自然冷却至室温,形成含CpG基序的目的片段,此后将此DNA片段插入线性载体的相应的酶切位点,最后,将其转化感受态大肠杆菌而得到的基因工程重组质粒;第二步:根据目的片段两端的重组质粒DNA序列,设计特异引物;第三步:以重组质粒为模板,加入特异引物,并进行三温循环的PCR扩增,具体参数为:92℃~98℃预变性5~10分钟;92℃~98℃,45~60秒,50~58℃,45~60秒,72℃,45~60秒,进行30~35个循环;最后在72℃延伸10分钟。 |
摘要 | 含CpG DNA畜禽疫苗佐剂的PCR制备方法,据由序列为:5’-GGTGCATCGATGCAGGGGGG-3’、5’-GGTGCGTCGATGCAGGGGGG-3’及5’-TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT-3’串联而成的D19D282006 DNA片段的序列,合成其正链和负链,在合成的寡核苷酸末端加能与载体末端匹配的碱基,将此寡核苷酸片段、退火缓冲液、无菌重蒸水混合后,于90℃~100℃水浴中3分钟以上,冷却至室温,形成含CpG基序的目的片段,将DNA片段插入载体相应的酶切位点,并将其转化感受态大肠杆菌得到重组质粒;据目的片段两端的重组质粒DNA序列,设计特异引物;以重组质粒为模板,加入特异引物,进行三温循环PCR扩增,具体参数为:92℃~98℃预变性5~10分钟;92℃~98℃,45~60秒,50~58℃,45~60秒,72℃,45~60秒,进行30~35个循环;最后在72℃延伸10分钟。 |
国际公布 |