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由克隆的维生素D结合蛋白衍生的巨噬细胞激活因子

公开(公告)号 CN1174097C  
公开(公告)日 2004.11.03  
申请(专利)号 CN96195808.1  
申请日期 1996.06.05  
专利名称 由克隆的维生素D结合蛋白衍生的巨噬细胞激活因子  
主分类号 C12N15/10  
分类号 C12N15/10;C07K14/435  
分案原申请号  
优先权 1995.6.7 US 08/478,121; 1996.3.19 US 08/618,485  
申请(专利权)人 山本信人  
发明(设计)人 山本信人  
地址 美国宾夕法尼亚州  
颁证日  
国际申请 PCT/US1996/008867 1996.6.5  
进入国家日期 1998.01.24  
专利代理机构 永新专利商标代理有限公司  
代理人 林晓红  
国省代码 美国;US  
主权项 用于将维生素D3结合蛋白即Gc蛋白质或维生素D3结合蛋白区域III即Gc区域III克隆到杆状病毒的方法,包括选择和利用杆状病毒载体克隆Gc蛋白质或Gc区域III的步骤:(a)利用免疫筛选方法从人肝λgt11分离全长Gc蛋白质DNA文库并且插入到非融合的杆状病毒载体中;或通过用EcoRI和HaeIII酶消化Gc蛋白质DNA而分离Gc蛋白质的起始前导序列加5’末端4个基酸的DNA和Gc蛋白质区域IIIDNA,并利用连接酶将其插入到非融合杆状病毒载体pVL1393的EcoRI位点;或利用HaeIII和BamHI酶分离Gc蛋白质区域IIIcDNA并且利用连接酶将其插入到融合的杆状病毒载体pPbac中以取代信号序列下游的SmaI-BamHI填充片段;(b)通过将昆虫细胞用载体DNA和野生型杆状病毒DNA共转染以分离携带全长Gc蛋白质cDNA或Gc蛋白质区域IIIcDNA的重组杆状病毒;和(c)在昆虫细胞中繁殖重组杆状病毒并且纯化克隆的Gc蛋白质或克隆的区域蛋白质Cd。  
摘要 借助于杆状病毒载体克隆了维生素D结合蛋白(Gc蛋白质)和其小区域(约为Gc肽的1/5,已知称作为区域III)。用固定化的β-半乳糖苷酶和唾液酸酶处理克隆的Gc蛋白质和克隆的区域(Cd)肽分别产生巨噬细胞激活因子GcMAFc和CdMAF。这些克隆的巨噬细胞激活因子和GcMAF可用于治疗癌症,HIV感染和骨质疏松症,也用作为免疫和接种的佐剂。研制了在癌症和HIV感染的患者中检测血清或血浆α-N-乙酰氨基半乳糖苷酶的方法和抗体-夹心ELISA试剂盒。  
国际公布 WO1996/040903 英 1996.12.19  
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