公开(公告)号 | CN1482243A |
公开(公告)日 | 2004.03.17 |
申请(专利)号 | CN02139604.3 |
申请日期 | 2002.09.13 |
专利名称 | 鼻咽癌相关基因NGX6表达产物的获取及抗体的制备 |
主分类号 | C12N15/12 |
分类号 | C12N15/12;C12N15/70;C12N15/62;C12Q1/68;C07K14/435;A61K39/395 |
分案原申请号 | |
优先权 | |
申请(专利权)人 | 中南大学 |
发明(设计)人 | 李桂源;李江;张秋红;谭琛 |
地址 | 410083湖南省长沙市麓山南路 |
颁证日 | |
国际申请 | |
进入国家日期 | |
专利代理机构 | 中南大学专利中心 |
代理人 | 龚灿凡 |
国省代码 | 湖南;43 |
主权项 | 一种鼻咽癌相关基因NGX6表达产物的获取,采用多聚酶链式反应方法克隆NGX6基因蛋白编码序列,构建该基因的融合表达质粒,导入JM109的大肠杆菌中,IPTG诱导其在大肠杆菌中的表达,SDS-PAGE电泳,Western blot鉴定,用GST融合蛋白纯化试剂盒纯化融合蛋白,本发明据原核表达载体pEGX-3X的GST阅读框架设计引物,使NGX6基因的编码区阅读框与GST的阅读框架一致;其特征在于:以含NGX6基因的质粒为模板(0.1μg),加入上述引物各10pmol进行扩增,回收PCR产物条带;用SmalI酶切PCR回收产物及pEGX-3X载体,产生匹配的粘末端;小胶回收试剂回收线性的4.9kb的载体,NGX6编码区片段;将pEGX-3X载体与NGX6基因连接,构建成符合阅读框的GST-NGX6融合基因;用含融合基因的pEGX-3X质粒转化大肠杆菌JM109,小量制备质粒DNA,SalI和NotI酶切鉴定是否含插入片段,含插入片段的阳性克隆质粒DNA纯化后用DNA自动测序仪测序。 |
摘要 | 一种鼻咽癌相关基因NGX6表达产物的获取及抗体的制备。本发明采用多聚酶链式反应方法克隆NGX6基因蛋白编码序列,构建该基因的融合表达质粒,导入JM109的大肠杆菌中,IPTG诱导其在大肠杆菌中的表达,SDS-PAGE电泳,Western blot鉴定,用GST融合蛋白纯化试剂盒纯化融合蛋白,本发明据原核表达载体pEGX-3X的GST阅读框架设计引物,使NGX6基因的编码区阅读框与GST的阅读框架一致。NGX6是鼻咽癌发生和发展的重要的相关基因之一;它的表达产物蛋白质作用于鼻咽癌细胞,具有基因治疗意义;抗体可用于鼻咽癌诊断。 |
国际公布 |