公开(公告)号 | CN1453355A |
公开(公告)日 | 2003.11.05 |
申请(专利)号 | CN02109527.2 |
申请日期 | 2002.04.23 |
专利名称 | 从地龙体内提取超氧化物歧化酶的方法 |
主分类号 | C12N9/08 |
分类号 | C12N9/08;C07K1/14 |
分案原申请号 | |
优先权 | |
申请(专利权)人 | 刘玉才 |
发明(设计)人 | 刘玉才;刘晟至 |
地址 | 110014辽宁省沈阳市沈河区沈洲路28-4-E座432号 |
颁证日 | |
国际申请 | |
进入国家日期 | |
专利代理机构 | 沈阳智龙专利事务所 |
代理人 | 宋铁军 |
国省代码 | 辽宁;21 |
主权项 | 一种从地龙体内提取超氧化物歧化酶的方法,其特征在于:该方法的制备步骤如下:a、将活蚯蚓洗净,置于新鲜水中或含不超过0.3%(以重量计)的有机酸钠盐中清洗,直至其消化道内的污物被彻底清除,然后在除去其表面躯体上的所有污物;b、将活蚯蚓湿磨,得到的蚓汁在-60℃~-10℃的温度下冷冻后储存;c、新鲜的蚓汁或其冷冻物在PH值7.6、25mmol/LTris-Gly缓冲液中匀浆2L/kg,搅拌1~2小时,15000r/min离心30分钟,弃沉淀物得清夜;d、上述清夜于65℃加热10~20分钟,冷却至4℃,过滤后滤液中加入1.25倍体积的丙酮,收集沉淀,沉淀物用少量的PH值7.6、25mmol/LTris-Gly缓冲液溶解,弃沉淀物得上清液;e、上清液在搅拌下加入内含10molmg、10molCu、10molZn,饱和度达45%,继续搅拌15分钟,然后在2000r/min离心30分钟,弃去沉淀,向上清液中继续加入硫酸铵溶液,使其饱和度达65%,离心收集沉淀;f、将上述沉淀溶解在PH值7.6、25mmol/LTris-Gly缓冲液中,接着透析至无SO2-4透析液最后上DEAE-Sephadex A-50层析柱(柱床体积为2.5×50cm),收集洗脱液,浓缩、冷却、干燥,即得蓝绿色的Cu、ZnSOD。 |
摘要 | 本发明涉及一种从生物体内提取超氧化物歧化酶的工艺制备方法。该方法的制备步骤为:将活蚯蚓洗净,湿磨,得到的蚓汁经过冷冻、在缓冲液中匀浆、搅拌,离心,弃沉淀物得清液;上述清液进行加热,冷却,过滤后滤液中加入丙酮,沉淀物用缓冲液溶解,弃沉淀物得上清液;上清液在搅拌下加入mg、Cu、Zn,然后离心,弃去沉淀,向上清液中加入硫酸铵溶液,离心收集沉淀;将上述沉淀溶解在缓冲液中,接着透析至无SO2-4,透析液最后上层析柱收集洗脱液,浓缩、冷却、干燥,即得蓝绿色的Cu、ZnSOD。本发明的目的是提供一种从地龙的体内提取超氧化物歧化酶的方法,以解决消耗资源大、提取SOD成分低等方面存在的问题。 |
国际公布 |