公开(公告)号 | CN101096384A |
公开(公告)日 | 2008.01.02 |
申请(专利)号 | CN200710009083.0 |
申请日期 | 2007.06.08 |
专利名称 | 一种抗肿瘤融合蛋白的制备方法及其应用 |
主分类号 | C07K19/00(2006.01)I |
分类号 | C07K19/00(2006.01)I;C12N15/09(2006.01)I;C12N1/21(2006.01)I;A61K38/16(2006.01)I;A61K39/00(2006.01)I;A61P35/00(2006.01)I |
分案原申请号 | |
优先权 | |
申请(专利权)人 | 厦门大学 |
发明(设计)人 | 周克夫;李俊燕 |
地址 | 361005福建省厦门市思明南路422号 |
颁证日 | |
国际申请 | |
进入国家日期 | |
专利代理机构 | 厦门南强之路专利事务所 |
代理人 | 马应森 |
国省代码 | 福建;35 |
主权项 | 一种抗肿瘤融合蛋白的制备方法,其特征在于其包括以下步骤: 1)根据ProTα的基因序列,设计上游引物P1和下游引物P2,上游引物P1和下游引物P2分别为: 上游引物P1:5’-GCGGATCCATGTCAGACGCAGCCGTA-3’, 下游引物P2:5’-GCGAATCCCTAGTCATCCTCGTCGGTC-3’, 将上游引物P1引入BamHI酶切位点,将下游引物P2引入EcoRI酶切位点; 2)采用RT-PCR方法获得前胸腺素α原全长基因cDNA,将PCR产物纯化后与pMD18-TVector连接,重组载体命名为TP,转化DH5α感受态细胞,将鉴定的阳性菌液测序; 3)采用生物学软件DNAman对7个单克隆基因序列和参考的proTα的基因序列进行比对; 4)用EcoRI和BamHI双酶切ProTαPCR产物,将ProTα基因片断插入经同样双酶切的原核表达载体pGEX 6P-1中,命名为PP,转化大肠杆菌BL21,LB培养基,37℃培养,加入IPTG,37℃诱导表达,菌液离心后的沉淀用上样缓冲液溶解,沸水浴后离心取上清,进行SDS-PAGE电泳,获得GST-Proα融合蛋白; 5)将4经过转化的转基因BL21菌株超声破碎后,离心所获得的上清中含有可溶性的融合蛋白GST-Proα; 6)将上清经过GST亲和层析柱分离纯化获得高纯度的GST-Proα融合蛋白。 |
摘要 | 一种抗肿瘤融合蛋白的制备方法及其应用,涉及一种融合蛋白。根据ProTα的基因序列,设计上下游引物P1和P2,P1引入BamHI酶切位点,P2引入EcoR I酶切位点。用RT-PCR方法得前胸腺素α原全长基因cDNA,PCR产物纯化后与pMD18-T Vector连接,转化DH5α感受态细胞,对7个单克隆基因序列和参考的proTα的基因序列比对。用EcoRI和BamHI双酶切ProTαPCR产物,将ProTα基因片断插入经同样双酶切的原核表达载体pGEX 6P-1中,转化大肠杆菌BL21,加入IPTG,诱导表达,菌液离心后的沉淀用上样缓冲液溶解,离心取上清电泳,得GST-Proα融合蛋白。 |
国际公布 |