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聚合酶链式反应（PCR)技术
1 试剂
1.1 消化液
1.1.1 1M 三羟甲基氨基甲烷-盐酸(Tris-HCl)(pH8.0)
三羟甲基氨基甲烷 12.11g
灭菌双蒸水 80mL
浓盐酸 调pH至8.0
灭菌双蒸水 加至100mL
1.1.2 0.5M 乙二铵四乙酸二钠(EDTA)溶液 (pH8.0)
二水乙二铵四乙酸二钠 18.61g
灭菌双蒸水 80mL
氢氧化钠 调pH至8.0
灭菌双蒸水 加至100mL
1.1.3 20% 十二烷基磺酸钠(SDS)溶液 (pH7.2)www.med126.com
十二烷基磺酸钠 20g
灭菌双蒸水 80mL
浓盐酸 调pH至7.2
灭菌双蒸水 加至100mL
1.1.4 消化液配制
1M 三羟甲基氨基甲烷-盐酸(Tris-HCl)(pH8.0) 2mL
0.5mol/L 乙二铵四乙酸二钠溶液(pH8.0) 0.4mL
20% 十二烷基磺酸钠溶液(pH7.2) 5mL
5M 氯化钠 4mL
灭菌双蒸水 加至200mL
1.2 蛋白酶K溶液
蛋白酶K 5g
灭菌双蒸水 加至250mL
1.3 酚/氯仿/异戊醇混合液
碱性酚 25mL
氯仿 24mL
异戊醇 1mL
1.4 2.5mmol/LdNTP
dATP(100mmol/L) 20µL
dTTP(100mmol/L) 20µLwww.med126.com
dGTP(100mmol/L) 20µL
dCTP(100mmol/L) 20µL
灭菌双蒸水 加至800µL
1.5 8pmol/µL PCR引物
上游引物ATXU（2 OD)加入701µl灭菌双蒸水溶解，下游引物ATXD（2 OD)加入697µL灭菌双蒸水溶解，分别取ATXU、ATXD溶液各300µL，混匀即为8pmol/µL 扩增引物。
1.6 0.5单位Taq DNA聚合酶
5单位Taq DNA聚合酶 1µL
灭菌双蒸水 加至10µL
现用现配。
1.7 10×PCR缓冲液
1.7.1 1mol/L 三羟甲基氨基甲烷-盐酸(Tris-HCl)( pH9.0)
三羟基甲基氨基甲烷 15.8g
灭菌双蒸水 80mL
浓盐酸 调pH至9.0
灭菌双蒸水 加至100mL
1.7.2 10倍PCR缓冲液
1mol/L三羟基甲基氨基甲烷-盐酸(Tris-HCl)( pH9.0) 1mL
氯化钾 0.373g
曲拉通X-100 0.1mLwww.med126.com
灭菌双蒸水 加至100mL
1.8 溴化乙锭(EB)溶液
溴化乙锭 0.2g
灭菌双蒸水 加至20mL
1.9 电泳缓冲液(50倍)
1.9.1 0.5mol/L 乙二铵四乙酸二钠(EDTA)溶液 (pH8.0)
二水乙二铵四乙酸二钠 18.61g
灭菌双蒸水 80mL
氢氧化钠 调pH至8.0
灭菌双蒸水 加至100mL
1.9.2 TAE电泳缓冲液(50倍)
三羟基甲基氨基甲烷(Tris) 242g
冰乙酸 57.1mlL
0.5mol/L乙二铵四乙酸二钠溶液(pH8.0) 100mL
灭菌双蒸水 加至1 000mL
用时用灭菌双蒸水稀释使用
1.10 1.5％琼脂糖凝胶
琼脂糖 3g
TAE电泳缓冲液(50倍) 4mL
灭菌双蒸水 196mL
微波炉中完全融化，加溴化乙锭（EB)溶液20µL。
1.11 上样缓冲液www.med126.com
溴酚蓝0.2g，加双蒸水10mL过夜溶解。50g蔗糖加入50ml水溶解后，移入已溶解的溴酚蓝溶液中，摇匀定容至100mL。
1.12 其它试剂
异丙醇(分析纯)
70%乙醇
15mmoL/L氯化镁
灭菌双蒸水
