奥曲肽对急性坏死性胰腺炎肺损伤的治疗作用

【摘要】　目的　观察奥曲肽对急性坏死性胰腺炎(acute necrotizc pancreatitis,ANP)大鼠肺损伤的治疗作用，并探讨其机制。方法　选用大鼠63只,在胰胆管内注射5%牛磺胆酸钠溶液诱导大鼠ANP模型。观察奥曲肽对ANP大鼠肺组织形态及细胞因子变化的影响。结果　奥曲肽治疗组较ANP+NS组肺湿/干重显著降低，PaO2明显提高，肺泡灌洗液中蛋白质含量［奥曲肽组为(339.9±72.5)mg/L］和白细胞计数明显下降或呈下降趋势。同时，血浆内毒素、血清TNFα和NO2-/NO3-水平及肺组织NOS活性显著降低，肺组织血管内皮细胞和导管上皮细胞一氧化氮合酶(NOS)表达下调，肺组织病理学改变减轻。结论　奥曲肽对ANP大鼠并发肺损伤有一定的治疗作用，其机制与其对内毒素、肿瘤坏死因子-α和一氧化氮等炎症介质的调节作用有关。

　　Beneficial effects of octreotide on the lung injury following experimental acute necrotic pancreatitis in rats

　　【Abstract】　Objective　To investigate the possible beneficial effects of octreotide on the lung injury following acute necrotizing pancreatitis (ANP) and the mechanisms.Methods　The ANP model of rat was established by injection of 5 % sodium taurocholate into the choledochus.Results　Octreotide could decrease Wet/dry lung ratio significantly at all indicated time-point. At 12th h after induction of ANP, PaO2, protein content in BALF, plasma endotoxin level, serum NO2-/NO2-, and NOS activity were much lower in octreotide-treated rats than those in untreated group (P＜0.05). Leukocyte count in BALF was also decreased with some exte nt but without statistical significant (P＞0.05). Serum concentration of TNFα was lower dramatically in octreotide-treated group than in ANP+NS group. Pathological studies showed that inflammatory cell infiltration and pulmonary interstitial edema were improved, and type II epithelial cells were well preserved in octreotide-treated group.Conclusion　Octreotide showed its beneficial effects on lung injury in both functional and morphologic alterations during the course of ANP. Regulatory roles of octreotide on pro-inflammatory factors, such as endotoxin, TNFα, and NO could be considered as one of the major mechanisms under this situation.

　　【Key words】　Acute pancreatitis；　Somatostatin；　Acute respiratory distress syndrome；　Cytokine

　　我们以牛磺胆酸钠诱导大鼠，观察奥曲肽对急性坏死性胰腺炎(acute necrotic pancreatitis,ANP)大鼠肺脏形态和功能变化的影响以及对炎症介质的调节作用，现报道如下。

　　材料和方法

　　1.实验动物与主要试剂：雄性Spraque-Dawley大鼠63只，体重300～350 g。TNFα测试盒为Endogen公司产品。

　　2.方法：(1)ANP模型制备：大鼠实验前禁食12 h，自由饮水。ANP模型制备参照文献［1］。假手术组(sham operation,SO)大鼠仅作剖腹术。(2)实验分组：大鼠随机分3组：ANP+NS组(n=21)、ANP+奥曲肽组(n=21)和SO组(n=21)。ANP奥曲肽治疗组术后2、5、8、11 h分次于后肢根部皮下注射奥曲肽(Novartis公司产品)生理盐水溶液(1 mg/L)，剂量为(15 μg/kg体重)；ANP+NS组注射等容积生理盐水。(3)观察项目：术后3、6、12 h分别处死大鼠，取材观察下列指标：①肺湿/干重；②动脉血氧分压(PaO2,mm Hg)；③肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)白细胞计数、蛋白质测定；④血浆内毒素含量，采用偶氮显色法测定；⑤血清TNFα含量，采用ELISA测定；⑥血清NO含量(μmol/L)，采用硝酸还原酶法测定血清NO2-/NO3-的含量间接反映NO的生成量；

　　3.统计学方法：Student t检验。

　　结果

　　1.肺湿/干重比变化：ANP制备后3 h始肺湿/干重(4.25±0.52)较SO组显著增高［(4.02±0.50),P＜0.05］,至12 h达峰值(5.92±0.64)；奥曲肽治疗组术后3、6、12 h分别为4.04±0.48、4.16±0.49、4.98±0.36，显著低于ANP+NS组各相应时点值(P＜0.05)。

　　2.PaO2变化：术后12 h, ANP+NS组PaO2(76.1±7.6) mm Hg较SO组显著降低［(99.6±1.1)mm Hg，P＜0.05(1 mm Hg=0.133 kPa)］。奥曲肽治疗组PaO2［(92.9±11.0)mm Hg］显著增高，与SO组 ［(99.6±1.1) mm Hg］相比差异无显著性(P＞0.05)。

　　3.BALF中白细胞计数、蛋白质含量变化：ANP制备后BALF中白细胞计数呈递增趋势，于术后12 h达(1 628.6±453.6)×109 个/L，显著高于SO组［(414.3±106.9)×109 个/L，P＜0.05］。奥曲肽治疗组BALF中白细胞计数较ANP+NS组下降，但差异无显著性(P＞0.05)。术后12 h，ANP+NS组BALF中蛋白质含量［(467.2±60.1) mg/L］较SO组显著增加［(158.1±27.9) mg/L,P＜0.05］；奥曲肽组BALF中蛋白质含量为(339.9±72.5) mg/L,较ANP+NS组显著降低(P＜0.05)。

　　4.血浆内毒素变化：ANP制备后3、6 h各组间血浆内毒素水平变化差异无显著性(P＞0.05)；术后12 h，ANP+NS组血浆内毒素达(0.300±0.063) EU/ml，明显高于SO组［(0.045±0.012) EU/ml,P＜0.05］;奥曲肽治疗组为(0.116±0.025) EU/ml，显著低于ANP+NS组(P＜0.05)。

　　5.血清TNFα含量变化：术后3、6、12 h，ANP组血清TNFα分别为(249.1±90.3) ng/L、(55.9±16.4) ng/L、和(623.5±100.4) ng/L,显著高于SO组［(2.0±2.7) ng/L,P＜0.05］。奥曲肽治疗组分别为(44.6±19.5) ng/L、(4.4±3.2) ng/L和(143.1±38.2) ng/L,明显低于ANP+NS组(P＜0.05)。

　　6.血清NO2-/NO3-含量、肺组织NOS活性、及组织化学染色结果：术后12 h，ANP+NS组血清NO2-/NO3-含量为(99.87±28.76) μmol/L,较SO组［(39.16±6.19) μmol/L］显著增加，奥曲肽治疗组血清NO2-/NO3-含量为(59.20±6.20) μmol/L，较ANP+NS组明显下降(P＜0.05)。ANP+NS组肺组织NOS活性为(3.79±0.32) U/mg 蛋白,高于SO组［(1.74±0.31) U/mg 蛋白，P＜0.05］；奥曲肽治疗组为(2.61±0.29) U/mg 蛋白，较ANP+NS组显著降低(P＜0.05)。组织化学研究结果显示，SO组支气管上皮、肺血管内皮及神经纤维NOS表达弱阳性；ANP+NS组表达强阳性；奥曲肽治疗组NOS表达较ANP+NS组减弱。

7.病理学变化：ANP光镜下表现为肺泡壁增厚，间质充血水肿，大量中性白细胞浸润。奥曲肽治疗组上述病变减轻。电镜下，ANP组见Ⅱ型上皮细胞变形，板层小体排空至间质；微血管内皮细胞肿胀，可见微血栓形成；肺泡腔内大量炎症细胞和红细胞渗出，肺泡萎陷。奥曲肽治疗组病理改变减轻。

　　讨论

　　我们的实验结果发现BALF中白细胞数增加，肺泡间隔大量中性粒细胞浸润；超微结构进一步显示大量中性粒细胞、单核细胞贴壁并游出血管外，提示活化的中性粒细胞或单核细胞可能参与了ANP肺损伤。本研究结果提示，ANP大鼠血液中TNFα、内毒素及NO的水平均显著增高，肺组织中NOS活性增加，进一步说明了中性粒细胞相关性细胞因子参与了ANP肺组织损伤。本研究结果表明，奥曲肽可抑制ANP大鼠循环中的内毒素和TNFα的升高，抑制肺组织中NOS的活性，降低血液中NO水平，提示奥曲肽治疗ANP并发肺损伤的作用机制可能是部分通过抑制内毒素、TNFα和NO介导。

　　参考文献

　　［1］张明钧，王兴鹏，袁耀宗，等.一种大鼠急性胰腺炎模型制备方法的改良.上海第二医科大学学报，1995，15：244-245.