紫外可见分光光度法
一、基本原理紫外--可见分光光度法：是根据物质分子对波长为200-760nm这一范围的电磁波的吸收特性所建立起来的一种定性、定量和结构分析方法。操作简单、准确度高、重现性好。波长长(频率小)的光线能量小，波长短(频率大)的光线能量大。 100nm 200nm 400nm 800nm 400um 1m
通指
X-射线 紫外区 可见区 红外区 微波区 无线电波区
Beer-lambert定律： A=E l c A--吸收度 E-吸收系数 l ---液层厚度 c---溶液浓度吸收度浓度与厚度的关系。是吸收光度法的基本定律，重要前提是单色光。
摩尔吸收系数：指在一定波长下，溶液浓度为1mol/L , 厚度为1cm时的吸收度，用 表示。百分吸收系数：指在一定波长下，溶液浓度为1%(W/V) , 厚度为1cm时的吸收度，用 表示。
影响Beer定律因素：化学因素，光学因素
二、紫外--可见分光光度计： 主要部件：
1、 光源：要求光谱的光源，
2、 氢灯和钨灯(350nm)
3、 单色器：进口狭缝、准直镜、色散元件(棱镜和光栅)、聚焦透镜和出口狭缝组成。
4、 吸收池：用光学玻璃制成的吸收池，
5、 只能用于可见光区。用熔融石英(氧化硅)，
6、 可见紫外光区。医.学.全.在.线网站www.med126.com
7、 检测器：光电池：(硒光电池：用于可见光；硅光电池：紫外可见光) 内阻小，光电管：内阻高，电流易放大 。
8、 易疲劳。
9、 讯号处理和显示器
三、定性与定量方法：
(一)、定性鉴别：是多数有机化合物具有吸收光谱特征。一般用对比法。
1、对比吸收光谱特征数据
2、对比吸收度(或吸收系数)比值
3、对比吸收光谱的一致性
(二)、纯度检查：杂质检查与杂质限量检测
(三)、含量测定：
1、吸收系数法
2、标准曲线法
3、对照法
荧光分析法荧光分析法：利用荧光的物理特性而进行定性与定量测定的方法。荧光法比紫外可见灵敏。荧光光度计：激发光源、样品池、检测器、滤光片和单色器。医学全在线www.med126.com
红外分光光度计红外线：波长大于0.76um，小于500um的电磁波。 Hooke定律来描述分子的伸缩振动。当分子的振动频率与入射的红外频率相同时，分子对红外产生吸收。伸缩振动和弯曲振动。基频峰：分子吸收一定频率的红外线，振动能级由基态(V=0)跃迁至第一激发态时产生的吸收峰。倍频峰：振动能级由基态跃至第二、三激发态。统称泛频峰。吸收峰：用于鉴别官能团存在的吸收峰称特征吸收峰。指纹区：1250-400cm (8.0-25um)的低频区称为指纹区。红外分光光度计主要部件：光源、吸收池、单色器(棱镜和光栅)和检测器(真空热电偶)及记录装置。
