方法名称： |
黄连上清丸—大黄酸的测定—高效液相色谱法 |
应用范围： |
本方法采用高效液相色谱法测定黄连上清丸中大黄酸的含量。 本方法适用于中成药黄连上清丸。 |
方法原理： |
将供试品置索氏提取器内，加氯仿浸泡提取，提取液以氢氧化钠水溶液洗涤至无色，合并洗涤液作为供试品溶液。精密吸取对照品溶液和供试品液，分别注入高效液相色谱仪，用紫外吸收检测器，于波长254nm处检测大黄酸吸收值，以外标法计算含量。 |
试剂： |
1. 乙腈（色谱纯) 2. 0.1%(mL/mL)磷酸水溶液 3. 氯仿 4. 0.5％氢氧化钠水溶液 5. 甲醇 |
仪器设备： |
1 仪器 1.1 索式提取器 1.2 高效液相色谱 1.3 色谱柱 Spherrisorb C18 柱 (300 × 4.6mm，5µm)。 1.4 紫外吸收检测器 2 色谱条件 2.1 流动相：乙腈 0.1%磷酸水溶液 = 20 80 2.2 流速：0.6mL/min 2.3 检测波长：254nm 2.4 柱温：45℃ |
试样制备： |
1. 称取供试品 精密称取本品粉末1g。 2. 对照品溶液的制备 精密称取大黄酸对照品3.2mg，甲醇溶解，定容至100mL，作为对照品溶液。 3.供试品溶液的制备 将供试品置索氏提取器内，加氯仿浸泡过夜，提取8h，提取液以0.5％氢氧化钠水溶液100mL分次洗涤至无色，合并洗涤液至100mL量瓶中，以0.5％氢氧化钠水溶液定容，作为供试品溶液。 注：“精密称取”系指称取重量应准确至所取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。 |
操作步骤： |
1. 标准曲线的绘制 精密吸取对照品溶液1.25、2.5、5.0、7.5、10、15µL，分别注入高效液相色谱仪，用紫外吸收检测器，于波长254nm处测定大黄酸的吸收值，以对照品溶液进样量对峰面积绘制标准曲线，进行线性回归，得到回归方程。 2. 供试品的测定 精密吸取对照品溶液2µL、15µL，供试品液10µL，分别注入高效液相色谱仪，用紫外吸收检测器，于波长254nm处测定大黄酸的吸收值，以外标法计算出其含量。 |
参考文献： |
夏勤. HPLC法测定黄连上清丸中大黄酸的含量. 江苏药学与临床研究，2001，9(3)：15-16. |
