| 公开(公告)号 | CN1766106A |
| 公开(公告)日 | 2006.05.03 |
| 申请(专利)号 | CN200510060786.7 |
| 申请日期 | 2005.09.15 |
| 专利名称 | 脑钠肽（BNP)制备方法 |
| 主分类号 | C12N15/09(2006.01)I |
| 分类号 | C12N15/09(2006.01)I;C12N15/16(2006.01)I;C12N15/70(2006.01)I;C12P21/02(2006.01)I;C07K1/14(2006.01)I;A61K38/22(2006.01)I;G01N33/53(2006.01)I |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 浙江大学 |
| 发明(设计)人 | 周林福;陈 峰;朱海红;陈 智 |
| 地址 | 310029浙江省杭州市西湖区延安路浙大湖滨校区医学院 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 杭州中成专利事务所有限公司 |
| 代理人 | 冯子玲 |
| 国省代码 | 浙江;33 |
| 主权项 | 脑钠肽(BNP)的制备方法，其特征在于以下步骤： (1)采用PCR技术将表达BNP的目的基因扩增，并纯化其产物； (2)将纯化的PCR产物于BamHI与HindIII双酶切后定向插入经同样双酶切的pet32a，获得重组质粒Pet32a+BNP； (3)将重组质粒Pet32a+BNP转化至大肠杆菌DH5a，经培养扩增，抽提纯化，测序分析，获测序正确的重组质粒； (4)将测序正确的重组质粒转化至BL21DE30菌，在30℃，0.1mMIPTG条件下表达重组蛋白； (5)将表达重组蛋白的活化菌株接种到2-YT培养基恒温振荡培养，进行摇瓶实验，工程菌在发酵罐中高密度发酵，种子菌按5％比例接种，在低溶氧条件下诱导，放罐，离心得菌体； (6)将离心得到的菌体沉淀进行细胞裂解，洗涤出包涵体，溶解包涵体，His柱过柱纯化。 |
| 摘要 | 本发明公开了一种脑钠肽(BNP)的制备方法，为克服传统提取BNP方法成本高、收率低，目的蛋白容易变性，材料来源有限等诸多缺陷，本发明在制备BNP过程中，用PCR技术扩增目的基因，以Pet32a作为载体质粒，酶切定向插入BNP目的基因后形成重组质粒，以大肠杆菌DH5α，BL21(DE3)作为表达菌株，以His柱作为纯化柱子分离纯化目的蛋白。这种制备方法既可方便检测，又可增强重组蛋白的稳定性。运用本发明技术获得的BNP通过免疫学方法制成诊断试剂盒，可快速、准确、特异地诊断和鉴别诊断许多心血管疾病。 |
| 国际公布 |
