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睾丸特异性蛋白50人源抗体的制备及用途

公开(公告)号 CN1824678A  
公开(公告)日 2006.08.30  
申请(专利)号 CN200510016591.2  
申请日期 2005.02.25  
专利名称 睾丸特异性蛋白50人源抗体的制备及用途  
主分类号 C07K16/18(2006.01)I  
分类号 C07K16/18(2006.01)I;A61K39/395(2006.01)I;A61P35/00(2006.01)I;G01N33/577(2006.01)I  
分案原申请号  
优先权  
申请(专利权)人 李玉新;徐浩鹏;鲍永利  
发明(设计)人 李玉新;鲍永利;徐浩鹏;刘 洋;魏景艳;李 惟;乌 垠;孟祥颖;张 靖;单继东;易静雯  
地址 130021吉林省长春市人民大街5268号  
颁证日  
国际申请  
进入国家日期  
专利代理机构 吉林长春新纪元专利代理有限责任公司  
代理人 陈宏伟  
国省代码 吉林;22  
主权项 一种人源抗体AI,其基酸序列包含免疫球蛋白重链可变区和轻链可变区,二者通过连接链连接,所说的人源抗体与人TSP50蛋白有较强的结合活性,其氨基酸序列为: MAEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWV50 SAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLREDTAVYYCARR100 QRLRHYANNWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGSALSSELTQDPAVSVALG150 QTVRITCQGDSLRSYYASWYQQKPGQAPVLVIYGKNNRPSGIPDRFSGSS200 SGNTASLTITGAQAEDEADYYCNSRDSSGFVFGGGTKLTVVLGAA245 其中氨基酸残基77被P所替换的AI序列, 其中氨基酸残基102-108(LRHYANN)被KSGRK所替换的AI序列, 其中氨基酸残基99-108(RQRLRHYANN)被VRHRASRANL所替换的AI序列, 其中氨基酸残基230被K或RV所替换的AI序列。  
摘要 本发明提供一种睾丸特异性蛋白50人源单链抗体的制备方法,利用噬菌体抗体呈现技术,以人睾丸特异性蛋白50为靶抗原,通过免疫亲和筛选法对重组噬菌体人抗体可变区基因文库进行筛选。分离并克隆TSP50特异性单链抗体基因AI、AII和C8。继而把单链抗体基因AI、AII和C8分别插入到含有组氨酸尾的原核表达载体PelB中,转化Rosetta菌,通过IPTG诱导表达外源蛋白,将菌体裂解后用Ni-NTA柱亲和层析,得到纯化的单链抗体,ELISA鉴定其可以和TSP50全蛋白和50肽特异结合;并用基因工程的手段将此人源单链抗体大量表达。本发明还公开了睾丸特异性蛋白50人源单链抗体在女性乳腺癌等TSP50相关性疾病的诊断和治疗用途。  
国际公布  
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