公开(公告)号 | CN1291031C |
公开(公告)日 | 2006.12.20 |
申请(专利)号 | CN200410077749.2 |
申请日期 | 2004.12.29 |
专利名称 | 重组胸腺素α1的制备方法 |
主分类号 | C12P21/02(2006.01)I |
分类号 | C12P21/02(2006.01)I;C12N15/63(2006.01)I |
分案原申请号 | |
优先权 | |
申请(专利权)人 | 中山大学 |
发明(设计)人 | 徐安龙;姜孝玉;李 靖;于 琳;王 妍;陈尚武;王 磊;董美玲 |
地址 | 510275广东省广州市新港西路135号 |
颁证日 | |
国际申请 | |
进入国家日期 | |
专利代理机构 | 广州新诺专利商标事务所有限公司 |
代理人 | 华 辉 |
国省代码 | 广东;44 |
主权项 | 重组胸腺素α1的制备方法,其特征在于:选用大肠杆菌作为工程菌,按照以下步骤进行(1)具有大肠杆菌工程菌密码子偏好性胸腺素α1基因的融合表达载体的构建:(1.a)按大肠杆菌密码子偏好性化学合成胸腺素α1基因,其核苷酸序列为5’-TCTGAT GCT GCG GTC GAT ACC AGC AGT GAA ATA ACT ACG AAA GAC TTA AAAGAAAAG AAA GAG GTT GTG GAA GAA GCC GAG AAC-3’:(1.b)以5’-GGGGTACCTCTGATGCTGCGGTCGAT-3’为上游引物、5’-GTCAT GCGGCCGCGTTCTCGGCTTCTTCCACAA-3’为下游引物,扩增出目的基因片段;(1.c)目的基因片段通过酶切后,将目的基因定向克隆到原核融合表达载体pTRX上,构建融合表达质粒pTRX-Tα1。(2)工程菌的构建及发酵培养:(2.a)将上述的融合表达质粒pTRX-Tα1转化大肠杆菌;(2.b)大肠杆菌工程菌发酵培养;(3)重组胸腺素α1的制备与纯化。 |
摘要 | 本发明涉及一种重组胸腺素α1的制备方法:按大肠杆菌密码子偏好性化学合成胸腺素α1基因,扩增出目的基因片段,将目的基因定向克隆到原核融合表达载体pTRX上,构建融合表达质粒pTRX-Tα1。含表达质粒pTRX-Tα1的工程菌可表达出硫氧还蛋白—胸腺素α1融合蛋白,通过亲和层析和离子交换层析纯化融合蛋白,肠激酶酶切释放出Tα1,再通过亲和层析和HPLC纯化出Tα1。试验结果表明,Tα1的生物学活性与化学合成的胸腺素α1(日达仙)相当。 |
国际公布 |