云南红豆杉枝叶—紫杉醇和三尖杉宁碱的测定方法—HPLC-UV

本品细粉用乙酸乙酯-丙酮(1∶1)超声提取，经液相色谱仪分离，在227nm测定，外标法计算紫杉醇和三尖杉宁碱的含量

仪器设备  Agilentl100高效液相色谱仪；G1314A紫外检测器。

色谱条件  色谱柱： Angilent Hypersil ODS柱 (4.6mm×250mm，5μm)；流动相：甲醇-乙腈-水( 20∶30∶50) ；柱温：30℃；流速：1. 0 ml/min；检测波长：227 nm；进样量：10μl。

对照品溶液制备   分别精密称取紫杉醇、三尖杉宁碱对照品适量，各加甲醇制成每毫升约含0.0467mg的溶液，作为对照品液。

供试品溶液的制备  云南红豆杉枝叶自然干燥，粉碎，过60～80目筛，40℃减压干燥至恒重。称取药材约2. 00g，精确称定，置磨口具塞三角瓶中，加入乙酸乙酯：丙酮(1∶1) (30ml×2次)，25℃超声振荡提取40 min，滤过，上清液合并，减压蒸干，残渣加入蒸馏水10ml，石油醚(60～90℃)萃取( 10ml×3次)，石油醚层弃去，水液再用三氯甲烷萃取(10ml×3次)，合并各次三氯甲烷萃取液，用适量无水硫酸钠脱水后，减压蒸干，残渣加适量三氯甲烷溶解，加于氧化铝柱(中性，4g，内径0.8cm)上，用三氯甲烷洗去未被吸附的杂质，再用1%的CH3OH∶CHCl3 (V /V )淋洗，最后用5% CH3OH∶CHCl3 50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用甲醇溶解，定容至1ml，甲醇液经0. 45μm微孔滤膜滤过，作为供试品溶液。