云南红豆杉枝叶—10-去乙酰巴卡亭Ⅲ的测定方法—HPLC-UV

仪器设备  HP1100高效液相色谱仪(二极管阵列检测器、蒸发光检测器)

色谱条件  色谱柱：C18色谱柱( 250mm×4.6 mm，5μm)；流动相：甲醇2乙腈2水(5∶35∶6)；检测波长：227 nm；流速：0.8 ml/min；柱温：30℃；进样量：10μl。

对照品溶液制备  精密称取10-去乙酰巴卡亭Ⅲ对照品12.42mg于50 ml量瓶中，以甲醇溶解并定容，即得对照品储备液(0.2435 mg/mL)，精密量取对照品储备液1ml，定溶于10ml的量瓶中，作为对照品溶液。

供试品溶液的制备  取干燥、粉碎、过60目筛后的云南红豆杉药材枝叶10g，用95%乙醇∶乙酸乙酯( 90∶10) 150ml超声提取30min，抽滤，提取三次，合并滤液，50℃减压回收溶剂至浓膏，加入水∶石油醚( 1：1) 40ml萃取，去石油醚层，再加20ml石油醚萃取水层，多次萃取，直到萃取至石油醚无色，加入二氯甲烷10ml萃取水层，萃取多次，合并下层二氯甲烷萃取液，减压蒸干，用少量甲醇溶解，拌少量的硅胶挥干后过硅胶柱，硅胶柱用氯仿湿法装柱，分别用氯仿、氯仿∶甲醇( 97∶3) 、氯仿∶甲醇(90∶10) 进行梯度洗脱。收集氯仿∶甲醇(97∶3) 的洗脱液，挥干，用少量甲醇溶解，定容到1 ml，微孔滤膜(0.45μm) 滤过，作为供试样品。